常見的細胞輔助試劑及其應用

　　細胞輔助試劑在細胞培養、流式細胞術等實驗中發揮著關鍵作用，它們能夠優化實驗條件、提高實驗效率并確保結果的準確性。以下是一些常見的細胞輔助試劑及其應用：
 

　　一、細胞培養輔助試劑
 

　　L-谷氨酰胺
 

　　作用：細胞培養中細胞進行能量生成以及蛋白質和核酸合成所必需的一種營養素。
 

　　特性：不穩定，在中性溶液中會自發降解，降解率隨保存溫度而變。降解后生成的副產物氨對干細胞、原代細胞等具有毒性。
 

　　替代品：L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，其在水溶液中穩定性高，可保持長時間穩定的營養供給，并降低分解產物造成的細胞毒性。
 

　　胰島素
 

　　作用：對哺乳動物細胞具有多效合成作用，促進葡萄糖和氨基酸攝取、脂肪生成、單價陽離子和磷酸轉運、蛋白質和核酸合成。
 

　　應用：MCF-7和NIH:OVCAR-3等細胞需要額外添加胰島素以維持細胞狀態。
 

　　β-巰基乙醇
 

　　作用：維持細胞內的還原環境，保護細胞免受氧化損傷。
 

　　應用：Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細胞需要添加β-巰基乙醇以維持細胞狀態。
 

　　平衡鹽溶液
 

　　組成：主要由無機鹽、葡萄糖組成。
 

　　作用：維持細胞滲透壓平衡，保持pH穩定及提供簡單的營養。同時用于取材時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、配制其他試劑等。
 

　　其他添加劑
 

　　非必需氨基酸(NEAA)：含幾種非必需氨基酸的合劑，添加到原培養基中可提供更全面的營養支持。
 

　　HEPES：一種很強的緩沖劑，能使細胞培養基在pH7.2-7.6條件下緩沖能力增強，防止培養基pH迅速變動。
 

　　二、流式細胞術輔助試劑
 

　　紅細胞裂解液
 

　　作用：利用低滲原理破碎血液或骨髓標本中的紅細胞，消除紅細胞產生的干擾，從而實現對白細胞的表面抗原的準確分析。
 

　　特性：溫和的低滲條件下裂解紅細胞，操作簡單，紅細胞裂解，性能穩定，產生細胞碎片少。
 

　　固定破膜劑
 

　　作用：對細胞懸液進行固定和破膜，使抗體順利進入胞內，并使細胞形態仍然保存完整。可以減少實驗中非特異性染色，在加入破膜劑時也可以加入熒光標記抗體進行染色。
 

　　特性：破膜后細胞分群保持完整，溶血、破膜、染色一步完成，操作簡便，保持抗體的特異性、靈敏度以及可重復性。
 

　　刺激阻斷劑
 

　　作用：刺激細胞活化，提高細胞因子分泌量，便于檢測；同時阻斷細胞因子分泌到細胞外，使其聚集在細胞內，提高檢出率。
 

　　常用試劑：刺激素為Phorbol 12-Myristate 13-Acetate(PMA，佛波酯)和Ionomycin(離子霉素)，阻斷劑為Brefeldin A(BFA，布雷非德菌素A)和Monensin(莫能霉素)。
 

　　流式染色緩沖液
 

　　作用：適用于懸浮細胞的免疫熒光染色實驗，含BSA以疊氮鈉作為防腐劑。可用于抗體和細胞的稀釋，以及表面染色和流式分析的洗滌階段。
 

　　特性：有效降低非特異性結合，適用于各種流式細胞術實驗。
 

　　封閉試劑
 

　　作用：封閉細胞表面的Fc受體，減少抗體的非特異性結合，降低檢測背景，獲得更清晰的結果。
 

　　常用試劑：FcR阻斷劑(如CD16和CD32抗體)。